艾滋病,全称获得性免疫缺陷综合征(AIDS),是由免疫缺陷病毒(HIV)感染所引起的一种严重的传染性疾病。1985年美国批准第一种HIV抗体检测试剂以来,HIV抗体检测技术随着免疫学和分子生物学技术的迅速发展而不断更新。据卫生部2004年颁布的《全国艾滋病检测技术规范》,HIV抗体检测分为初筛、复检和确证三个步骤。
1、初筛、复检试验。
主要包括酶联免疫吸附试验、快速检测试验、化学发光免疫试验、时间分辨荧光免疫分析技术以及非侵入式HIV抗体检测。
1.1酶联免疫吸附试验(ELISA)。
HIV抗体ELISA试剂历经四代。
1985年第1代间接ELISA,HIV病毒裂解物为包被抗原,敏感性和特异性不高,窗口期约3个月;1990年第2代间接ELISA,基因工程重组或人工合成肽为包被抗原,能同时检测HIV-1和HIV-2,特异性较第1代有了很大提高,窗口期缩短了约20天;1994年第3代双抗原夹心法,包被抗原同第2代,但新增gp41多肽,可检测包括IgG、IgM、IgA等多种HIV抗体亚类,敏感性和特异性较高,窗口期缩短至3-4周,是当前主流产品;1998年第4代,HIV抗原和抗p24的抗体包被固相载体,能同时检测HIV抗体和p24抗原,灵敏度进一步提高,“窗口期”进一步缩短4-8d,但出现“第2个窗口期”,目前用于辅助诊断。
1.2快速检测(RT)。
包括免疫斑点试验、免疫层析试验、明胶颗粒凝集试验。该方法操作简单:不需要专门的仪器设备,快速:30min内可以得到检测结果,尤适用应急检测、HIV监测哨点、乡镇卫生院及社区卫生站等。
1.3化学发光免疫试验。
微粒子、微孔板式化学发光免疫分析技术检测HIV抗体,比ELISA具有更高的灵敏度。负载量子点并且包被纳米金的介孔材料构建的电致化学发光免疫传感器能够高选择性高灵敏度检测HIV抗体。
1.4时间分辨荧光免疫分析技术。
应用双抗原夹心联合时间分辨免疫荧光分析(铕标HIV抗原),灵敏度和特异性取得了极大提高。以上市HIV抗体ELISA试剂盒作为对照,本技术的试剂盒灵敏度100%,特异性98.9%,准确度99.4%。
1.5非侵入式HIV抗体检测。
除了血源检测,唾液、尿液检测已成为艾滋病检测的一种全新手段,在安全、便捷等方面更具有优势。
2、确证试验。
HIV抗体筛查阳性的样本需进行确证试验,主要有免疫印迹试验、条带免疫印迹试验,还包括放射免疫沉淀试验及免疫荧光试验等。
2.1免疫印迹试验(WB)。
WB是目前国内最常用的HIV阳性确认方法,ELISA+WB组合是公认的HIV诊断金标准。基本原理是将HIV全病毒抗原经SDS-PAGE电泳后再电转移至NC膜;加入待检血清,再加酶标抗人IgG和底物即可在膜相应位置呈现肉眼可辨条带,根据出现条带情况判定结果。
2.2条带免疫印迹试验(LIA)。
LIA是WB法的改进,用基因工程重组蛋白或化学合成多肽代替WB法所用的病毒裂解物抗原作为诊断试剂的抗原。
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