羊膜作为生物材料应用于基础及临床已经有多年的历史。早在20世纪初期就有用含羊膜的胎膜供体移植于烧伤和溃疡创面的报道,随后在颅脑外科、腹腔外科、妇产科及眼科均有其应用的报道。随着生物工程技术、组织工程技术的发展,羊膜的应用更加广泛,研究更加深入。

　　1、羊膜结构及功能

　　正常人羊膜组织结构分为上皮细胞层、基底膜、致密层、纤维细胞层及海绵层。通常制备好的羊膜只含有上皮细胞层、基底膜和致密层3层结构,而纤维细胞层、海绵层在制备时被剥离。上皮细胞层含有羊膜上皮细胞和由羊膜上皮细胞分泌的多种生长因子。

　　2、不同方法制备的羊膜特点

　　用于基础和临床研究的羊膜大致有新鲜羊膜、冻存羊膜和羊膜细胞外基质3种,它们各有特点[6]。

　　2.1新鲜羊膜

　　这种羊膜是将新鲜羊膜在无菌条件下洗尽血迹,剥离羊膜,置于4℃冰箱保存,24h内使用。新鲜羊膜保留了羊膜上皮细胞及细胞因子,用于治疗眼表疾病时,对眼表重建有利。但因含有细胞成分,有轻微抗原性,且保存时间短,使用不方便。

　　2.2冻存羊膜

　　取制备好的新鲜羊膜,置于4℃100％甘油中脱水,每24小时换液1次,共3次。储存于4℃恒温冰箱中备用。将脱水后的羊膜取出,加入含硫酸软骨素的100％甘油∶DMEM液(1∶1)中浸泡,-80℃超低温冰箱储存,6个月备用。与新鲜羊膜比较,保存时间长,使用较方便。

　　2.3羊膜细胞外基质

将经甘油脱水后的羊膜取出,PBS液水化,加入0125％胰蛋白酶,37℃室温下消化,再用细胞刮子刮除残存的羊膜上皮细胞,于倒置相差显微镜下,证实无细胞后羊膜上皮面朝上平铺于乙酸纤维薄膜纸上,加入含硫酸软骨素的100％甘油∶DMEM液(1∶1)中浸泡,置于4℃恒温冰箱储存,1周备用,或-80℃超低温储存,6个月备用。

有研究者将生理盐水漂洗后的羊膜用012％戊二醛交联,015％十二烷基磺酸钠、0125％胰酶脱细胞,反复漂洗,冷冻干燥,分装密封,环氧乙烷消毒备用[7]。这种材料除去了细胞和可溶性蛋白成分,只保留了原有组织中的不可溶成分,主要包括胶原、弹性蛋白、氨基葡聚糖和结构蛋白等,可作为细胞生长支架,促进细胞黏附,同时保存时间长,使用方便。