黄国林1，秦耀琮2，王权胜2，代波2，陆海旺2，宾彬2，唐乾利3*

 (1.广西岑溪市中医院，广西 岑溪 543200；2.广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530023；3.右江民族医学院，广西 百色 533000  E-mail：htmgx@163.com)广西中医药大学第一附属医院男科王权胜

【摘要】目的：探讨续断种子方(健脾益肾法)对大鼠睾丸生精作用及其对超微病理学的影响。方法：用奥硝唑所致的可逆性生精障碍大鼠模型，观察续断种子方对大鼠附睾超微病理学的影响。结果：①与正常组相比，模型组精子密度与活动率均明显低于正常组（P<0.05）；与模型组相比，左卡尼汀口服溶液组、续断种子方组精子密度与活动率明显高于模型组（P<0.05）；续断种子方组精子密度与活动率都比对照组高（P<0.05）。②模型组附睾管壁变薄，管腔内精子明显减少，不能充满管腔，排列紊乱，附睾管腔间间隙增大；续断种子方组及左卡尼汀口服溶液组附睾管壁较厚，精子充满管腔，排列较为规则，呈团簇样，管腔间隙较紧密，均与正常组类似。结论：续断种子方能拮抗并修复奥硝唑对大鼠睾丸附睾的超微结构损伤，维持了正常的生精功能。

【关键词】少弱精子症；续断种子方；模型大鼠；生精作用

少弱精子症发病率高，且有逐年增加趋势。通过应用续断种子方治疗少弱精子症的临床研究，我们发现续断种子方在临床中具有较好的疗效。本研究通过建立少弱精子症大鼠模型的实验方法，同时设左卡尼汀口服溶液作阳性对照，观察中药续断种子方对少弱精子症模型大鼠的生精作用。

1 材料

1.1实验动物分组

实验动物40只雄性大鼠，2月龄，体质量200~250g。由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK 桂 2003- 0003。采用随机数字表法随机分为正常组、模型组、续断种子方组、左卡尼汀口服溶液组各 10只。

1.2 药品及试剂:

续断种子方（主要药物组成：菟丝子15g、杜仲15g、续断15g、骨碎补15g、女贞子15g、枸杞子15g、党参15g、白术15g、淮山药15g），采用单味中药配方颗粒（免煎中药，由江苏省江阴市天江药业有限公司生产）；左卡尼汀口服溶液（由东北制药总厂生产，批准文号：国药准字H19990372）；奥硝唑（由西安博华制药有限公司生产，批准文号：国药准字H20010514）。

2 方法

2.1 分组及给药

参考文献[1]的造模方法，建立大鼠少弱精子症动物模型，造模方法及给药方法如下：

所有大鼠适应性喂养一周后开始灌胃。正常组大鼠每天给予生理盐水灌胃；模型组予奥硝唑ORN（800mg/kg・d-1）；对照组大鼠每天给予ORN(800mg/kg・d-1)+左卡尼汀口服溶液100mg/kg・d-1)；实验组大鼠每天给予ORN(800mg/kg・d-1)+续断种子方配方颗粒(10g/kg・d-1)。左卡尼汀口服溶液、续断种子方均溶于生理盐水。以上药物均为每日新鲜配制，当日使用。大鼠灌胃剂量为4ml/d，1次/天，连续四周，给药四周后对各组大鼠进行指标测定。实验自开始之日起，每周称重1次，调整药物用量，并观察记录大鼠的体形、毛色、步态、觅食及活动情况，以及大鼠有无死亡及其可能的原因。

2.2 标本采集

各组大鼠在末次给药24h后，用20%乌拉坦（0.5ml/100g）麻醉后，取各组一半大鼠剪开下腹部，取一侧附睾、睾丸，称其重量并迅速置于盛有2ml预温37℃的生理盐水的平皿中剪碎，于37℃温水浴中温浴2分钟，大鼠精子充分游离，用MACRO精子计数板检测精子浓度，并计算精子活动率。；取大鼠另一侧睾丸组织及附睾组织，保存在戊二醛中固定24h小时送做超微结构检查。模型组大鼠2只用于造模病理检查后处死,续断种子方组大鼠1只、左卡尼汀口服溶液组大鼠1只灌胃死亡。

2.3 统计学处理

数据处理使用SPSS17.0统计软件，多组计量资料方差齐性时采用单因素方差分析、方差不齐时采用秩和检验。P<0.05有统计学意义，P>0.05无差异性。

3 结果

3.1 续断种子方对模型大鼠精子密度及活动率的影响

大鼠附睾游离精子密度与活动率检测结果显示：与正常组相比，模型组精子密度与活动率均明显低于正常组（P<0.05）；与模型组相比，左卡尼汀口服溶液组、续断种子方组精子密度与活动率明显高于模型组（P<0.05）；续断种子方组精子密度与活动率都比对照组高（P<0.05）。（见表1）

表1 各组大鼠附睾游离精子密度及活动率比较

  组别            n        精子密度(×106/ml)   活动率(%) 

    正常组            10       53.05±4.55         70.20±8.54

    模型组             8       35.34±4.22*        40.04±7.05*

左卡尼汀口服溶液组    9        47.14±4.87△#       63.23±6.34△#

续断种子方组         9        50.25±5.08△#       66.34±7.58△#