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作者
摘要：目的：探讨利用血清蛋白指纹图谱筛选乳腺癌血清标记物对乳腺癌临床诊断的价值和意义。方法：利用美国蛋白芯片系统PBSII/C型包括蛋白指纹图谱仪和蛋白质芯片检测42例乳腺癌患者血清蛋白质的相对含量，同时以42例正常人血清作对照。结果：在乳腺癌患者和正常人患者中共发现三个表达峰有统计学差异的蛋白质，其质荷比分别为4800Da、6410Da和9300Da，其灵敏性89.3％、特异性92.7％，显示这三个血清标记物对乳腺癌诊断诊断效果明显。结论：血清蛋白指纹图谱技术在筛选乳腺癌血清标记物的数据可靠，能够应用于乳腺癌的生物学诊断中来，应该加以推广。
蛋白指纹图谱是一种基于质谱技术的蛋白质分析技术，在这种方法中，兴趣蛋白被裂解成小肽段，通过质谱仪如基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDL-TOF-MS)或电喷雾飞行时间质谱(EST-TOF-MS)进行精确的分析。许多研究显示，将蛋白指纹图谱技术应用到临床诊断上来是有效的，尤其是肿瘤标志物的筛查上。乳腺癌已经成为妇女死亡的重要原因之一，其早期诊断对于乳腺癌的控制意义重大[1]。本研究旨在探讨利用血清蛋白指纹图谱筛选乳腺癌血清标记物对乳腺癌临床诊断的价值和意义，现将研究结果汇报如下：
1、一般资料
1.1研究对象
总结了自2009年6月以来我院接诊的乳腺癌患者30例(已经经过手术和病理确诊)，年龄在34-76岁，平均年龄51岁;体重46kg-77kg，平均54.6kg;其中I期7例，
II期9例，IIIa期7例IIIb期3例，IV期2例。同时选取30例正常人作为对照。正常人在年龄、体重等指标和患者相比均不具统计学差异。
1.2实验材料与设备
高效液相色谱仪使用购买自美国安捷伦公司，型号为Agilent 1200型。Tris-HCL、醋酸钠、盐酸、10×PBS Buffer、尿素、三氟乙酸、氢氧化钠和其他试剂均购买自Sigma公司。质控芯片all in one peptide和all in one protein各一根，蛋白质芯片和表面增强激光解析电离-飞行时间-质谱( SELDI-TOF MS)均购买自美国Cipher-gen公司。
1.3方法
1.3.1蛋白质芯片处理 将芯片插入生物芯片处理器，每孔加入200微升结合缓冲液，置振荡器500r/min震荡5min，弃上清[2]。重复以上操作一次。
1.3.21上样 在芯片处理器每孔中加入100ul预备样品， 4℃ 下500r/min震荡1小时。弃样品后，芯片每孔加入200ul缓冲液，室温置振荡器500r/min震荡5min，弃上清，再次加入缓冲液200ul，重复操作1次[3]。弃缓冲液，每孔加入200ul去离子水后立刻甩出，共洗3次。迅速拆开芯片处理器，取出芯片，待表面干燥后每孔滴加0.8SPA缓冲液，常温烘干。
1.4统计学处理
用BiomakerWizard3.1软件和SPSS13对乳腺癌患者和正常人血清峰值表现差异的蛋白质数据作分析，筛选出差异有统计学意义的蛋白质峰[4]。结合各个峰的权重，比较不同蛋白质峰排列组合的判别分析结果，选出最佳组合，建立乳腺癌的蛋白指纹图谱诊断模型。
2、结果
在乳腺癌患者和正常人患者中共发现三个表达峰有统计学差异的蛋白质，其质荷比分别为4800Da、6410Da和9300Da，其灵敏性89.3％、特异性92.7％，显示这三个血清标记物对乳腺癌诊断诊断效果明显。
3、讨论
在我国，乳腺癌是女性最经常发生的恶性肿瘤也是女性死亡的第二大原因，据统计占到女性肿瘤的31％。乳腺癌的早期检测将大大有助于癌症的控制，从而在癌症转移前促进乳腺癌浸润状态时的诊断和治疗的。已经有研究显示一些血清蛋白标记物在乳腺肿瘤的诊断中具有极高的价值。美国食品和药物监督管理局通过了肿瘤标志物如CA15.3和CA27.29，建议将这两项标志物仅用于监测晚期乳腺癌治疗或复发。可以单独使用或与现有的标志物联合使用的生物标志物在乳腺癌的筛查中的需要仍然很迫切。
蛋白指纹图谱技术不同于只能单一指标分析的传统肿瘤标志物，通过对蛋白质动态、全景的分析，将病人疾病早期最微小基因表达产物(蛋白质或多肽)系统地分析，获得待检标本中各种蛋白的含量和蛋白质分子量等信息，绘制成蛋白指纹图谱(EPG)，通过计算机软件与正常人、亚健康状态人群、良性疾病和癌症病人的指纹图谱库对照，比较分析差异，就能快速、敏感和特异地发现和捕获新的与疾病相关的蛋白。
本研究旨在探讨利用血清蛋白指纹图谱筛选乳腺癌血清标记物对乳腺癌临床诊断的价值和意义。通过蛋白质芯片结果发现在乳腺癌患者和正常人患者中共发现三个表达峰有统计学差异的蛋白质，其质荷比分别为4800Da、6410Da和9300Da，其灵敏性89.3％、特异性92.7％，显示血清蛋白指纹图谱技术在筛选乳腺癌血清标记物的数据可靠，能够应用于乳腺癌的生物学诊断中来，应该加以推广。
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