[摘要]  目的：明确以端粒酶活性水平变化作为卵巢上皮性癌药敏检测指标的可行性，为临床提供一种新的体外药敏检测方法。方法：以TRAP-PCR-ELISA法检测卵巢上皮性癌中端粒酶活性，并测定用药后端粒酶活性变化，以端粒酶活性下降计算肿瘤细胞生长抑制率，以此作为评价化疗药物敏感性的指标，并与MTT法测定结果及临床疗效相比照。结果：SKOV3细胞数量与端粒酶活性呈正相关。卵巢上皮性癌中端粒酶阳性率为86.36%。在11例卵巢上皮性癌原代培养中，6例端粒酶活性大于2U者对CDDP均不敏感，4例（66.67%）对ADM不敏感。CDDP、ADM作用后，端粒酶活性下降超过30%者分别为9例（81.82%）、9例（81.82%），MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率在30%以上者分别为4例（36.36%）、7例（63.64%），两种方法与临床疗效符合率分别为90.91%、63.64%及90.91%、72.73%。结论：端粒酶活性增高程度与卵巢上皮性癌对CDDP、ADM的敏感性有关，用药前后端粒酶活性下降程度可作为卵巢上皮性癌体外药敏检测指标。天津市第一中心医院妇科瞿全新

[关键词]  端粒酶   卵巢上皮性癌   药物敏感性

A study of telomerase activity as chemotherapy sensitivity marker of ovarian epithelial carcinoma in vitro  Qu Quanxin, Mi Ruoran, Guo Hualing. Department of Obstetrics and Gynecology, General Hospital of Tianjin Medical University, Tianjin, 300052,China

[Abstract]  Objective  To study the feasibility of telomerase as sensitivity marker for ovarian epithelial carcinoma in vitro. Methods  The activity of telomerase in ovarian epithelial carcinoma were tested by TRAP-PCR-ELISA before and after CDDP and ADM treatment and calculate the inhibition rateof tumor cells according to the degree of decrease of telomerase activity. The result were contrasted with that of MTT. Results  The number of SKOV3 cells was positive relationship with telomerase activity. The positive rate of telomerase activity in ovarian epithelial carcinoma was 86.36%. 6 cases which telomerase activity more than 2U were not sensitive to CDDP, 4 cases（66.67%） to ADM in 11 primary ovarian epithelial carcinoma culture. The telomerase activity decrease more than 30% after CDDP and ADM treatment were 9（81.82%） and 9（81.82%）, respectively. The inhibition rate tested by MTT more than 30% were 4（36.36%） and  7（63.64%）, respectively. The clinical correspondence of the two methods were 90.91%, 63.64% and 90.91%, 72.73%, respectively.  Conclusions  The degree of increase of telomerase activity was relationship with the sensitivity of ovarian epithelial carcinoma to CDDP and ADM. The degree of decrease of telomerase activity after CDDP and ADM treatment could become the marker to value the sensitivity of ovarian epithelial carcinoma in vitro.

[Key words]  Telomerase  Ovarian epithelial carcinoma  sensitivity

近30年来，关于体外化疗药物敏感性测定方法的研究异常活跃，但由于各种技术上的限制，使药敏检测结果与临床治疗反应之间出现很大差异，如何消除肿瘤组织中多种正常细胞成分的干扰，是解决这一问题的关键。由于端粒酶在正常细胞与恶性肿瘤细胞中表达水平存在差异，如果端粒酶活性改变能作为判断化疗药物对肿瘤细胞的杀伤效应，则端粒酶将有望成为一种新的体外药物敏感性检测指标，极大地提高检测结果的准确性及可靠性。

1.材料与方法

1.1 材料

1.1.1卵巢上皮性癌细胞系SKOV3：SKOV3细胞端粒酶呈阳性，确定肿瘤细胞数量与端粒酶活性水平之间的关系，有助于判断中由于卵巢上皮性癌组织原代培养细胞中存在不均质性，既有肿瘤细胞，又有其他成分的细胞，由中国医学科学院天津血液病研究所药物室提供，在RPMI1640加10%胎牛血清，37℃5%CO2饱和湿度环境下培养传代。

1.1.2 卵巢上皮性癌组织的原代培养：22例卵巢上皮性癌组织标本，取自1998年11月～1999年8月期间在天津医科大学总医院妇科手术的患者，均为卵巢浆液性腺癌，手术分期为Ⅰ期者1例，Ⅱ期者2例，Ⅲ期者16例，Ⅳ期者3例。

1.1.3 主要试剂：端粒酶检测试剂盒购自德国宝灵曼(Boehringer Mannheim)公司。

1.2 方法

1.2.1 SKOV3细胞数量与端粒酶活性的关系：选择处于对数生长期的SKOV3细胞系，按等比稀释，浓度分别为5×105/ml、2.5×105/ml、1.25×105/ml、6.25×104/ml、3.125×104/ml、1.56×104/ml、7.8×103/ml，分别取2ml接种于6孔板，以上述方法测定端粒酶活性。

1.2.2 端粒酶活性检测：以Trap-PCR-ELISA法检测卵巢上皮性癌中端粒酶活性，方法按试剂盒要求操作,标准阴性对照值（A450-A690）应小于0.25U，标准阳性对照值（A450-A690）应大于1.5U，当△A＞0.2U判断为阳性。

1.2.3 加药后原代培养细胞中端粒酶活性变化：调整细胞浓度为1×105/ml，取2ml接种于6孔板，继续培养12小时，加入CDDP 10μg/ml、ADM 1μg/ml，继续培养72小时终止，测定端粒酶活性。

1.2.4 MTT法测定肿瘤细胞抑制率：按文献方法操作[1]。CDDP 10μg/ml、ADM 1μg/ml，每组设24个重复孔。按以下公式计算肿瘤细胞抑制率。当抑制率≥30% 时,为药物敏感；抑制率