细胞免疫治疗疗法是采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量成千倍增多，靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞。

　　目前主要的疗法包括：细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)疗法、树突状细胞(DC)疗法、DC+CIK细胞疗法、自然杀伤细胞(NK)疗法、ACTL肿瘤细胞靶向治疗、CLS疗法、DC-T细胞疗法等。湖北省肿瘤医院肝胆胰科包乐群

　　一、 细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)疗法

　　(一)何谓CIK细胞 ?

　　细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，它是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，由于该细胞群中多数细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又被称为NK细胞样T淋巴细胞。CIK细胞具有增殖速度快、杀瘤活性高、杀瘤谱广及非MHC限制性杀瘤的优点。目前，CIK疗法被认为是新一代抗肿瘤过继免疫治疗的首选方案。

　　(二)、CIK细胞在抗肿瘤治疗过程中有何特点 ?

　　1、CIK细胞增殖速度快，可以在短期内大量扩增，其效应细胞CD3+CD56+的比例和数量更是

　　明显增加,可以达到1000多倍;

　　2、CIK细胞具有识别肿瘤的机制，对正常细胞无毒性作用。

　　3、CIK细胞杀瘤活性高，杀瘤谱广，对多种耐药肿瘤细胞同样敏感。

　　4、CIK细胞是典型的个体化生物治疗模式。它来源于自体 T 淋巴细胞，将这类细胞回输后，可提高对肿瘤细胞的杀伤活性，还能提高机体的免疫能力，从而对肿瘤治疗施以双重作用。

　　5、杀瘤活性不受CsA、FK506等免疫抑制剂的影响。

　　6、对正常骨髓造血前体细胞毒性很小。

　　7、能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡。

　　(三)CIK细胞如何发挥抗肿瘤的作用 ?

　　1、CIK细胞对肿瘤细胞的直接杀伤CIK细胞能分泌穿孔素(proforin，PFP)和颗粒酶(granzyme)，通过穿孔素/颗粒酶途径介导杀伤靶细胞。

　　2、CIK细胞活化后产生大量细胞因子，发挥抑瘤杀瘤作用CIK细胞活化后产生大量的炎性细胞因子，如IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-α等，不仅对肿瘤细胞有直接抑制作用，还可通过调节机体免疫系统反应性间接杀伤肿瘤细胞。

　　3、诱导肿瘤细胞凋亡

　　CIK细胞能活化肿瘤细胞凋亡基因，并且CIK细胞内FLIP、Bcl-2、Bcl-xl、DAD1和survivin等抗凋亡基因表达上调。这些原因共同导致了CIK细胞可以通过Fas/FasL信号通路诱导肿瘤细胞的凋亡，从而对肿瘤进行有效的杀伤。

　　二、 自然杀伤细胞(NK)疗法

　　(一)何谓NK细胞 ?

　　自然杀伤细胞(natural killer cells，NK)是与T、B细胞并列的第三类群淋巴细胞。可非特异性直接杀伤靶细胞，这种天然杀伤活性既不需要预先由抗原致敏，也不需要抗体参与，且无MHC限制。人体内的NK细胞数量较少，在外周血中约占淋巴细胞总数的10％～15％，在脾内约有3％～4％，也可出现在肺脏、肝脏和肠粘膜，但在胸腺、淋巴结和胸导管中罕见。

　　(二)NK细胞的抗肿瘤机制

　　1、天然细胞毒性(Natural cytotoxicity)

　　天然细胞毒性是指不需要抗体介导，也不经预先致敏而直接杀伤靶细胞的作用。与ADCC不同，该作用需要多个表面受体结合靶细胞传递溶细胞信号。

　　2、抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)

　　NK细胞也可以通过表面IgG Fc受体(FcγRIII)介导，识别杀伤与IgG抗体特异性结合的肿瘤或病毒感染的靶细胞。

　　3、NK细胞介导靶细胞凋亡。

　　4、NK细胞产生大量的细胞因子，如IFN-y、TNF-a、GM-CSF、IL-3、M-CSF等，调节巨噬细胞、DC细胞、T细胞、B 细胞及内皮细胞等细胞的免疫活性。

　　(三)NK细胞治疗肿瘤的适应征有哪些?

　　对早、中、晚期恶性胶质瘤，恶性黑色素瘤、恶性淋巴瘤、肾癌、肺癌、食道癌、肝癌、结肠癌、乳腺癌、卵巢癌等多种恶性实体瘤均有较好的疗效;部分暂时不宜做手术、介入或其他治疗的肿瘤患者，也可先进行NK细胞治疗，以提高机体的免疫功能;另外NK细胞还参与体内许多功能和损伤的调节，在干细胞功能、心血管病、肝肾等许多疾病中亦具有重要作用。

　　三、 自体树突状细胞(DC)疗法

　　(一)什么是DC细胞

　　树突状细胞(Dendritic Cells，DC)源自骨髓中的前体细胞，是已知机体内抗原呈递能力最强的细胞，比普通抗原呈递细胞强1000倍，它在负载肿瘤抗原后，能刺激T淋巴细胞分化为具有抗肿瘤活性的细胞毒性T淋巴细胞，对肿瘤细胞实施特异性杀伤。

　　(二)DC细胞的作用机制

　　DC细胞可通过多种机制发挥其抗肿瘤免疫作用。

　　1、诱导细胞免疫

　　DC摄取肿瘤抗原后，将其加工处理为肽-MHC分子复合物表达于细胞表面，进而与T细胞表面的T细胞受体(T cell receptor，TCR)结合，同时与DC表面高表达的CD80、CD86等共刺激分子协同作用下，共同激活T细胞，启动CD8+细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)介导的免疫应答。

　　2、增强体液免疫

　　一方面，DC通过促进抗原特异性CD4+辅助性T细胞(helper T cell，Th)的产生，促进抗体生成;另一方面，DC直接作用于B细胞，促进免疫球蛋白的分泌。DC通过I型干扰素(interferon，IFN)的分泌，直接诱导初始和记忆B细胞分化为浆细胞，产生大量免疫球蛋白IgM。

　　3、分泌多种细胞因子或趋化因子

　　DC分泌的IL-12可诱导Th0细胞向Th1细胞分化，启动细胞性免疫应答，抑制IL-12的产生则促进IL-10的分泌及Th2细胞极化。IL-15以膜结合方式存在于DC表面，显著刺激次级淋巴器官中自然杀伤细胞的增殖。DC还可分泌一种特异性趋化因子，选择性趋化初始型T细胞，增强对免疫应答的诱导作用。

　　4、DC通过与某些肿瘤细胞相互接触，直接抑制肿瘤细胞的生长。

　　5、肿瘤抗原致敏的DC可释放一种具有抗原递呈能力的囊泡小体exosomes，该小体内含有大量MHC-I、II类分子。

　　四、 DC-CIK细胞疗法

　　(一)什么是DC-CIK细胞

　　DC-CIK细胞免疫治疗是指利用树突状细胞(DC)及细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)在体外共同培养大量扩增后将活化的免疫细胞回输入患者体内，可直接杀伤肿瘤细胞，同时辅助或刺激人体自身免疫系统，完善或增强病人免疫机能，达到抑制或杀灭肿瘤细胞的目的。

　　(二)DC-CIK细胞的作用机制

　　DC细胞被称为寻找肿瘤细胞的雷达，能够在体内随着血液全身各处主动搜索、识别肿瘤细胞，并把信息传递给免疫活性细胞，促使其激活和大量增殖。CIK细胞被称为杀伤肿瘤细胞的精确导弹，该细胞对肿瘤细胞的精确识别杀伤能力很强，尤其对手术后或放化疗后的患者治疗效果显著，能清除残留的微小的转移病灶，防止肿瘤细胞的扩散和复发，并能提高机体免疫力。将DC与CIK联合应用可以起到"1+1>2"的治疗效果。DC-CIK细胞发挥抗肿瘤作用的机制如下：

　　1、释放细胞内的穿孔素、颗粒酶等活性物质至肿瘤细胞内，溶解肿瘤细胞。

　　2、通过Fas-FasL途径诱导肿瘤细胞凋亡。

　　五、 ACTL肿瘤细胞靶向治疗

　　AAV-DC-CTL™肿瘤细胞靶向治疗技术是将无致病性的野生型腺相关病毒(Adeno-associated virus,AAV) 通过基因重组技术改建为携带特定肿瘤相关抗原决定簇基因的重组腺相关病毒，感染患者的外周血单核细胞 (Monocytes. Mo)，经细胞因子诱导，单核细胞转化为具有强大抗原提呈功能的DC细胞。经此技术获得的DC细胞在体外刺激患者的T淋巴细胞，产生有效杀伤肿瘤细胞的细胞毒性T淋巴细胞(CytotoxicT lymphocytes,CTL)。所产生的CTL 具有肿瘤抗原特异性，即靶向性，仅针对某种或数种特定肿瘤相关抗原阳性的肿瘤细胞以及PSMA 阳性的肿瘤新生血管内皮细胞具有杀伤作用，对抗原阴性的细胞无任何作用。

　　CTL细胞是CD8+的T细胞亚群，为一种特异T细胞，对某些病毒、肿瘤细胞等具有直接杀伤作用，与自然杀伤细胞构成机体抗病毒、抗肿瘤的重要防线。CTL杀伤机制有：

　　1、释放穿孔素，颗粒酶，裂解靶细胞。

　　2、通过FasL介导靶细胞的凋亡。

　　主要作用途径 ：AAV-TAAs转染DC- CTL靶向性杀伤肿瘤细胞 DC刺激淋巴细胞产生CTL。