精液常规分析包括精液量、精液外观、液化时间、PH、粘稠度、精子密度、活力与活动率、存活率以及形态学分析等。
(一)精液量
WHO推荐使用的精液量测定方法有两种,一是用锥形底的刻度量筒法,二是称重法。因称重法与精液密度有关,故推荐以刻度量筒法检测精液量为好。不推荐用目测法来检测精液量。
精液量的正常参考范围为2~6ml。发现精液量少时,应注意询问收集方式是否正确,或鉴别是否有逆行射精,此时可嘱咐患者留取尿液,显微镜观察尿液中是否有大量精子,必要时尿液可离心后再镜检。
临床意义:精液量少于0.5ml,为无精液症;0.5~2ml为少精液症;多于6ml为多精液症。无精液症常见于不射精或逆行射精;少精液症在排除人为因素如性生活频度高、精液收集不完整后,常见于附属性腺感染、不完全性逆行射精和精囊的发育不全;多精液症常见于附属性腺功能亢进。
(二)外观
正常精液外观呈乳白色、均质、半流体状液体。临床意义:长时间未排精的人射出的精液略带淡黄色,老年男性精液呈暗黄色。精液清亮、透明常见于无精子或少精子症男性;精液呈棕红色或带血,称为血精,常见于精囊性炎、前列腺炎等生殖系统疾病,也可于苗勒管囊肿、结石、肿瘤如前列腺癌、输精管的微小损害等。
(三)液化时间
精液标本留取后应充分混匀(但不能剧烈摇动),置于35℃~37℃水浴箱中待其液化。正常精液标本在60分钟内液化,但通常情况下在15分钟内精液液化即完成。因此,精液液化后即可进行精液常规指标的检测。
男科实验室常常会遇到液化不全的精液标本,如果不进行处理,将会影响到检测结果的准确性。对于液化不全精液标本,可以加入1%的10mg/ml的靡蛋白酶,混匀后置37℃水浴箱中温育30分钟后,精液液化可明显改进,此操作不影响精浆生化指标包括@葡糖苷酶、酸性磷酸酶和果糖的检测,但精子运动指标中直线性可显著降低(P=0.025),侧摆幅度可显著升高(P=0.029),而其他指标如精子密度、活动率、a+b级活动率、直线运动速度、曲线运动速度、鞭打频率、平均路径速度等不受影响。机械混匀或菠萝蛋白酶对促进精液液化可能也起作用。这样的操作应记录在检测报告上。
临床意义:精液液化不全在排除人为因素(射出精液的第一部分丢失)后,常见于前列腺疾病,特别是和前列腺炎有关。
(四)PH值
推荐有PH试纸进行检测。将一滴混匀精液在PH试纸上均匀展开,30秒钟内,与标准带进行比较读出其PH值。
正常精液PH值为7.2~8.0。
临床意义:当附属性腺或者附睾有急性感染性疾病时,精液的PH值可以大于8.0.当输精管阻塞或先天精囊腺缺如时,均可导致精液PH值降低。测定精液PH值应在精液液化后立即测定,因为精液放置时间较长会影响PH值测定结果。
(五)粘稠度
一般用一滴管吸入精液,而后让精液依靠重力滴落并观察拉丝长度,如果长度大于2厘米,视为异常。也可以用一玻棒插入精液中,提起玻棒,观察拉丝长度,同样视长度大于2厘米为异常。粘稠度增加,与精液液化不全一样,同样会影响精液分析结果,处理方法同液化不全精液标本。
(六)精子密度
精子密度检测结果的准确性主要取决于精子计数池。尽管WHO手册推荐使用改良牛鲍氏血细胞计数板作为精子计数池。并且建议了质量控制方法,但许多其他类型的计数池亦被引入男科学实验室,包括一次性计数池如DROP、StandardCount、Cell Vision、MicroCell等,它们均为20μm深,精液无需稀释即可直接分析,均为通过毛细管作用加样的计数池;反复使用的计数池,包括2X-CEL、Makler、JCD、Burker及血球计数池,前两者池深20μm,精液无需稀释即可分析,而后三者精液均需作1:20稀释;以及既可一次性又可反复使用的Cell-VU计数池。这些计数池的精确性和准确性已被广泛地评价和比较。
(七)精子活力与活动率
精子活力即精子的运动能力。精子活力的分析有手工和CASA系统分析两种方法。不推荐使用手工方法分析精子活力,而推荐使用CASA系统分析精子活力。因为精子活力的手工分析方法十分不准确。活动精子可能在几秒钟内已从一个视野进入另一个视野。而且,精子活力分析受时间和温度的影响,手工分析时这种影响更大。CASA系统是一种比较客观的分析精子活力的方法,具有较高的精确性。但CASA系统分析精子活力时需进行人工校正,在保证计算机捕捉的精子数与视野中真实的精子数一致后,再进行分析。
推荐精子活力分类标准:精子活力分为a、b、c、d四级:
a级:快速前向运动,即37℃时速度≥25
μm/s,或20℃时速度≥20μm/s;25μm大约相当于5个头的长度或半个尾的长度;
b级:慢速或呆滞的前向运动;
c级:非前向运动
d级:不动。
精子活动率为a+b+c级精子百分率总和。
可选择精子活力分类标准:精子活力分为a、b、c三级:
a级:前向运动;
b级:非前向运动;
c级:不动。
精子活动率为a+b级精子百分率总和。
临床意义:正常生育男性a级精子≥25%,a+b级精子≥50%,精子活动率≥60%。精子活力降低,即a级精子<25%,a+b级精子<50%时,称为弱精子症,病因复杂,最可能与附属性腺或附睾炎症有关。
(八)精子存活率
精子存活率以活精子所占百分比表示,可用染色技术确定,一般采用伊红染色法。这是由于死精子的细胞膜受损可透入一定染料,从而使死精子着色而活精子不着色。用光学显微镜计数200个精子,即可得出精子存活率。伊红Y染色法:用生理盐水将伊红配制成5g/L的溶液,将一滴新鲜精液与一滴伊红Y溶液在载玻片上混匀,并覆以盖玻片,30秒后用光学显微镜观察,活精子不着色,死精子被染成红色。
精子存活率的正常参考值为:≥75%
临床意义:精子存活率可用以核实精子活力的准确性,精子存活率一般高于精子活动率,因为死精子比例不应超过不动精子的比例。如果活的但不动的精子占很大的比例,应怀疑精子鞭毛结构有缺陷。
(九)精子形态学分析
正常形态精子百分率是评价精子受精能力的重要指标之一。目前,用于精子形态学分析的染色方法有:改良巴氏染色法、苏木精―伊红染色法、瑞氏染色法、瑞吉氏染色法、Diff―Quik染色法和Shorr染色法。6种染色方法对精子头大小的影响不同,瑞―吉氏和瑞氏染色法的精子头的长轴和短轴最低,而HE和Shorr染色法的精子头长长轴和短轴介于巴氏染色法和Diff―Quik染色法之间。6种精子染色方法的染色效果亦不同,Diff―Quik和Shorr染色法可以很清楚地区分顶体和核,其次是HE染色法,而巴氏、瑞氏和瑞―吉氏染色的精子顶体和核分界不很明显。基于不同染色方法对精子头大小的影响、染色效果以及操作的简易与否,Diff―Quik和Shorr染色法值得推荐。
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