酶联免疫法,简称ELISA。它的中心就是让抗体与酶复合物结合,然后通过显色来检测。步骤:ELISA用血清来检测,首先血液要经过至少半个小时的凝集,然后取血清将酶复合物用稀释液稀释后,加血清及阴性、阳性对照,还有就是质控品。经过一个小时的孵育,然后洗板,加底物,半个小时避光反应后加终止液即完成反应部分,然后就是读数。由数值来判断结果的阴性或阳性。
分类
血清学检查 > 病毒的血清学检查
测定原理
ELISA法:用灭活风疹病毒抗原包被的载体可与被检样品中的特异性抗体结合,用酶标记的抗人免疫球蛋白与底物检测相应抗体。
试剂
除灭活风疹病毒抗原包被的微孔板,阴、阳性参考血清外,其余同一般ELISA。
操作方法
1、样品采集,作过筛试验仅需采集单份血样,但若需判断病毒感染者的免疫状态,需对可疑风疹患者在出现斑疹后3天内以及随后的14~21天分别取样同时检测。
2、同一般ELISA,在对照和样品各孔中加PBS 50μl,继加样品10μl,25℃保温45min,洗涤、吸干。
3、各孔加酶标记物250μl,同法保温和洗涤。
4、再加pNPP底物溶液250μl,同法保温和洗涤后,加1mol/L氢氧化钠50μl中止反应,测定各孔吸光度值405nm,判断被测样品结果。
5、若为阳性结果,可将样品作进一步稀释后作抗体滴度测定,比较先后两份样品结果,并进行判断
判定
1、风疹病毒的IgG和lgM抗体均为阳性,或者是IgG抗体滴度≥1:512,表明有风疹病毒近期感染。
2、风疹病毒的IgG和IgM抗体均为阴性,表明没有受过风疹病毒感染。
3、风疹病毒的lgG抗体滴度<1:512,lgM抗体为阴性,说明有过既往感染史。
4、此外,再次感染风疹病毒,由于只出现短暂的IgM抗体或出现的水平很低,所以不易查出。因此风疹病毒IgG抗体滴度在双份血清中有4倍以上升高,那么无论lgM抗体是否为阳性,都是风疹病毒近期感染的指标。
临床意义
风疹又称德国麻疹,发病高峰为春季至初夏。风疹病毒抗体的阳性率随年龄增大而上升,新生儿可以通过早年感染了风疹病毒的母亲而获得风疹病毒的IgG抗体。lgM抗体于发疹4天左右产生,约10天达高峰,持续6—12周,偶尔也可持续达一年;IgG抗体较lgM抗体出现稍晚,逐渐上升,1—2个月达高峰,以后下降,多维持终生,人群中80%以上的人此抗体阳性。
测定
正常范围: 抗风疹病毒抗体IgM阴性,抗风疹病毒抗体IgG阴性。
检查介绍: 抗风疹病毒抗体IgM主要用于诊断风疹病毒的急性感染,一般在感染后2周血清出现抗风疹病毒抗体Ig。
临床意义: 阳性:风疹病毒感染。
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