肝纤维化(liver fibrosis)是继发于肝脏炎症或损伤后组织修复过程的代偿反应，表现为细胞外基质在肝内过量沉积[1]。肝星状细胞(又称贮脂细胞，Ito细胞或窦周细胞, hepatic stellate cells，HSC)激活并转化为肌成纤维样细胞和成纤维细胞是肝纤维化发生、发展的核心环节[2]。酪氨酸蛋白激酶在HSC激活过程中细胞内信号传递方面起了重要的作用。酪氨酸蛋白激酶抑制剂可能通过抑制细胞内信号传导而影响HSC激活。本文就酪氨酸蛋白激酶、酪氨酸蛋白激酶抑制剂与肝星状细胞的激活作一综述。

　　HSC位于肝细胞与肝窦内皮细胞之间的Disse间隙，形态不规则，胞体呈卵圆形，胞质富含类维生素A脂滴。正常时呈静息状态，其功能主要是储存和代谢维生素A，合成和分泌少量的ECM，并有一定的产生胶原酶的作用 [1]-[3] 。肝脏受损时HSC被激活[4]，表现出特征性变化：类维生素A脂滴丢失，快速发生形态学改变;表达α-平滑肌肌动蛋白，具有收缩性;表达多种细胞因子及受体;细胞明显增殖，合成大量的ECM。很多因素对HSC激活起促进作用，包括ECM成分和结构的改变，多种生长因子、细胞因子、趋化因子、氧化应激产物和其他可溶性因子的分泌等，这些因素常同时作用于HSC，彼此相互影响，形成一种介质-靶点-ECM间相互作用的复杂网络。

　　1、 酪氨酸蛋白激酶介导的细胞内信号传导

　　TPK为一个大的结构多样的酶家族，分为受体型和非受体型两种。受体型TPK是细胞内段具有酪氨酸激酶活性的一类跨膜受体，如血小板衍生生长因子受体(PDGFR)、成纤维细胞生长因子受体(FGFR)、表皮细胞生长因子受体(EGFR)等。非受体型TPK 是细胞浆中具有酪氨酸激酶活性的蛋白质。目前认为TPK信号传导系统主要与细胞生长和增殖有关。

　　1、1受体型酪氨酸蛋白激酶

　　RTK信号传导通路是细胞外刺激信号传递到细胞核内最基本的途径之一。RTK的效应通过两条途径实现，即(1)一系列大分子相互作用引起级联反应，最基本的途径为RTK-Ras-MAPK途径，其传递的基本环节如下：RTK 衔接蛋白(adaptor，含有SH2，SH3结构的蛋白，如Grb2) 鸟嘌呤核苷酸释放因子(GRF，如Sos) Ras蛋白 - GAP酶激活蛋白 MAPKKK(Raf) MAPKK(MEK) - MAPK(ERK) 底物(转录因子) DNA合成或转录[5]。(2)通过酶的作用产生小分子第二信使，主要是产生磷酸肌醇信号传导系统的一些产物，如PLC、PLA2、PI3-K、PI4-K等。

　　在未受刺激的细胞中，衔接蛋白Grb2通过其C端的SH3区与Sos结合成复合物，游离于胞质中。当细胞膜上的受体被配体激活后，发生二聚化和酪氨酸自身磷酸化，从而为Grb2 N端的SH2结构域提供一个结合位点，吸引Grb2-Sos复合物向细胞膜靠近，引起膜质区Sos的增高，并间接导致Sos与其底物Ras靠近，通过Sos分子中的核苷酸转换酶的作用使Ras-GDP成为激活型的Ras-GTP[6]。

　　Raf-1是激活型Ras的靶分子。激活的Ras通过诱导Raf-1的质膜定位效应[7]，使胞质内游离的Raf-1转移到质膜上，通过自身磷酸化或激酶催化而激活，然后启动MAP激酶级联反应。激活的Raf-1使MEK上的Ser残基发生磷酸化而被激活，后者再使下游的ERK激活。ERK易位进入核内，激活转录因子，进而调节基因的转录。

　　1、2 非受体型酪氨酸蛋白激酶

　　非受体型TPK是细胞浆中具有酪氨酸激酶活性的蛋白质，在其激活过程中，可引起胞质蛋白包括受体本身的Tyr残基磷酸化，目前发现的有Src家族、JAK家族、Syk/ZAP-70家族、Tec家族等。

　　近年来，多数学者将JAK-STAT通路归为非受体型TPK。JAK是与不具有内源性激酶活性受体相联系的Janus可溶性酪氨酸激酶(Janus kinases， JAK)，其底物是细胞信号转录激活因子(STAT)。其作用途径为：细胞因子与其受体结合后引起受体分子的二聚化，这使得与受体偶联的JAK激酶相互接近并通过交互的Tyr磷酸化作用而激活。激活的JAK激酶催化受体本身的Tyr残基磷酸化并形成相应的STAT分子与受体复合物结合的“停泊位点”(docking site)，使STAT得以通过其SH2结构域与受体上的磷酸Tyr残基结合并在JAK激酶的作用下实现其C端Tyr残基的磷酸化。两个磷酸化的STAT分子利用SH2结构域的Arg与Tyr之间的作用形成同/异二聚体并离开受体进入细胞核，与目的基因的启动子区域结合，激活相应基因的转录和表达[8] 。

　　2、 肝星状细胞激活后细胞内信号传导的变化

　　HSC激活的分子生物学机制十分复杂，其中TPK起了非常重要的作用。正常HSC中既存在着TPK，又存在着去磷酸化酶，细胞磷酸化和去磷酸化反应，维持着一个动态平衡。肝脏受损后，HSC受多种生长因子、细胞因子和氧化应激产物以及ECM成分和结构的改变的影响，从静息状态转为激活状态，TPK活性增加。

　　2、1 RTK与HSC激活

　　现已发现HSC内MAPK信号传导途径主要有ERK和SAPK(应激激活蛋白激酶)途径。一些细胞因子如PDGF、EGF、NGF等作用于HSC表面的RTK，激活ERK传导途径，经以下途径转导信号：(1)通过磷酸化PLC-γ(磷脂酶C-γ)的Tyr残基而激活PLC-γ，引起肌醇磷脂代谢;(2)激活Ras-GAP;(3)磷酸化PI-3-K而使其激活;(4)通过SH3区与Grb2/sem5调节Ras的信号转导。Ras激活后再激活Ser/Thr激酶Raf，Raf激活MAPKK，MAPKK再磷酸化MAP激酶而使其激活，最后激活转录因子，调节基因转录，HSC表现出分化、增殖。紫外线、渗透压休克及有些细胞因子(如IL-1、TNF-α)等作用于HSC，激活SAPK传导途径(SAPKs包括c-jun、p38MAPK、N-端蛋白激酶(JNK)和一系列的蛋白激酶)，导致转录因子如Zf9、SP1、NFκB、c-myb等的的激活，最终导致基因表达上调，HSC表型发生变化 [5][10]。

　　2、2 非受体型TPK与HSC激活

　　有的细胞因子与其受体结合后引起受体分子的二聚化或寡聚化，使得与受体偶联的JAK激酶相互接近并通过交互的Tyr磷酸化作用而激活，使JAK-STAT信号传导途径发生级联磷酸化。研究表明，STAT-1α在调节生长因子作用下HSC和其他间质细胞的激活方面起到重要作用。Kawada等[11]已证实STAT-1在调节生长因子引起的细胞激活中的作用，指出cAMP可通过影响STAT-1的激活而抑制DNA的合成。

　　粘着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)为一种非受体型TPK，具有独特的结构和功能，在整合素介导的ECM向细胞内传递信号中扮演关键性的角色，通过ECM引起整合素在粘着斑处聚集，经整合素-踝蛋白(talin)，talin-FAK间的相互作用，多个FAK分子聚集到粘着斑复合物处，通过自身磷酸化而激活，FAK激活后，可偶联于含SH2结构域的信号蛋白，包括Src激酶家族，PI-3-K，Grb2/Sos等;也可偶联于含SH3结构域的信号分子，包括踝蛋白，桩蛋白(paxillin)，P130Cas及一种Rho蛋白(Ras蛋白的一个家族)的GTP酶激活蛋白(GAP)等。通过如此偶联，FAK将整合素介导的信号下传，参与HSC细胞功能和细胞骨架的调节[12][13]。

　　3、 酪氨酸蛋白激酶抑制剂对HSC 激活的抑制作用

　　由于激活的HSC是肝纤维化时ECM的主要来源细胞，因此，可以设想通过抑制HSC的激活达到抗纤维化的作用，而在HSC的激活过程中TPK起了非常重要的作用，推测TKI可能通过抑制细胞内信号传导而抑制HSC的激活，从而抑制肝纤维化。不少研究者在这方面做了大量的工作。

　　由于肽底物和变构调节位点最能反映蛋白激酶的生物学特性，有学者根据TKI作用位点的不同，将其作了简要分类。

　　3、1与ATP竞争的TKI

　　此类TKI与蛋白激酶竞争结合ATP结合位点。80年代发现黄酮类槲皮素(quercetin)能抑制TPK和丝/苏氨酸蛋白激酶。以后Ogawara等[9]从假单胞菌属中分离得到一种三羟基异黄酮它能抑制EGF受体TPK活性。目前TKI在肿瘤方面的研究较深入，在肝纤维化方面，许多学者也作了大量的研究。Elke等[14]研究表明黄酮类化合物水飞蓟宾及其类似物能减少体外培养的HSC和成纤维细胞增殖，降低ECM成分的基因表达，其机理可能为下调TGF-β1基因的表达。Kawada等[15]研究表明，白藜芦醇及槲皮素具有调节RTK的活性的作用，能抑制HSC的增殖和激活，降低α-SMA的表达，干扰PDGF的活性，降低周期蛋白D1的水平，抑制枯否细胞产生NO和TNF-α。Bonacchi等[16]通过体外实验证实趋化因子受体CXCR3与配体结合后激活RAS/ERK途径，促Src磷酸化，增加PI-3-K及其下游信号通路的活性，Genistein能抑制这种作用，而PI3-K特异性的抑制剂Wortmannin却无抑制作用，提示Src的激活可能是CXCR3激活RAS/ERK途径所必须的。其他黄酮类化合物如PD98059也可能通过抑制TPK信号传导通路而抑制HSC激活[17][18]。

　　3、2 与蛋白/肽底物竞争的TKI

　　此类TKI具有与底物蛋白磷酸化位点相同的序列，从而有抑制蛋白激酶的作用。主要包括癌基因抑活药(erbstatin)及其类似物如AG126、AG1128、ST1571等，其特异性较高。目前关于这类TKI对HSC激活的影响的研究也越来越多。Kinnman等[19]用免疫组化和RT-PCR的方法观察在胆汁淤积性肝病大鼠模型及体外培养的HSC中，PDGF-BB和ET-1能促进HSC趋化和增殖，而PDGF受体酪氨酸激酶抑制剂ST1571则可抑制这种作用。Iwamoto等[20]研究发现PDGF-BB刺激HSC导致p44MAPK/p42MAPK的增加，而PDGF受体酪氨酸激酶抑制剂AG1295则通过抑制PDGF-Rβ的自身磷酸化而抑制HSC的增殖。

　　3、3 以其他方式作用的TKI

　　这类TKI如除莠霉素(herbimycin A)可特异性地抑制TPK活性，有研究表明其作用位点在酶的巯基，通过与巯基相互作用而引起TPK不可逆的失活。然而其具体的作用机制还不太清楚，有待进一步研究。Sato等[21]通过间接免疫荧光技术观察到在胶原凝胶上培养的HSC，与对照组相比，细胞骨架蛋白如微管、纤维肌动蛋白等表达增加;通过免疫细胞化学法观察到TPK磷酸化作用增强。而TKI herbimycin A通过抑制整合素结合I型胶原纤维而抑制细胞骨架组合。Carloni等[22]探索了GGTI-298对人HSC中FAK的抑制作用。

　　4、 酪氨酸蛋白激酶抑制剂的应用前景

　　HSC的激活和增殖与TPK表达水平及活性有关。我们能否以TPK为靶子进行抑制HSC的激活?目前关于TKI对HSC激活的抑制作用尚处于实验阶段，但它在体外和完整细胞内的作用可能不同，其抑制常数可受细胞内多种因素的影响。另外，作为药理学工具的TKI，不仅要能直接与TPK结合，有较好的膜通透性，而且更重要的是对TPK要有严格的特异性，因为体内广泛存在TPK，TKI在抑制HSC内的TPK的同时，也会抑制其他细胞内的TPK。尤其是广谱的TKI，在起治疗作用的同时，也可能带来较大的副作用。虽然目前发现了许多非常有用的TKI，但其特异性距所期望的还相差很远。随着TKI的深入研究，它在肝纤维化中的应用也会逐步走向临床。