目的:构建免疫球蛋白重链可变区(IgHV)基因片段与细胞因子GM-CSF(粒单细胞集落刺激因子)或IL-2(白细胞介素2)的融合基因表达载体作为家族特异性抗淋巴瘤核酸疫苗,接种动物了解该疫苗抗淋巴瘤免疫功能。
方法:从脐带血免疫球蛋白基因文库获得6个片段长度差异较大的IgHV3片段基因片段,测序后利用生物信息资源分析预测其重链可变区的T细胞表位,同时分析本室以前构建的IgHV16个片段。选择包含了绝大多数T细胞表位的IgHV1、IgHV3基因,将框架区(FR)为主的IgHV(FR)基因片段及IgHV(FR)与GM-CSF或IL-2基因连接后形成的融合基因克隆到真核表达载体中。表达载体通过脂质体转染COS细胞, ELISA法确定GM-CSF或IL-2的表达情况。将一些表达载体作为核酸疫苗免疫小鼠,通过间接免疫荧光法和细胞因子分泌法检测小鼠抗同一家族淋巴瘤和正常淋巴细胞的免疫反应。
结果:计算机评分系统预测显示在每个IgHV序列中约存在30个左右分别受HLA位点限制的T细胞表位,90%以上的T细胞表位位于框架区,积分排位于前10%的T细胞表位都位于框架区。成功构建了去除CDR3区后以框架区(FR)为主的IgHV1(FR)和IgHV3(FR)真核表达载体。成功构建了IgHV1 和IgHV3基因与GM-CSF或IL-2基因的融合基因表达载体。IgHV(FR)-GM-CSF/pcDNA3.0中GM-CSF的表达量高于对照组 200倍以上;IgHV(FR)-IL-2/pcDNA3.0中IL-2的表达量高于对照组 60倍以上。IgHV1(FR)-IL-2免疫动物组在首次免疫后第2周开始检测到抗属于IgHV1家族的淋巴瘤Namalwa细胞系的抗体,IgHV1(FR)组在第4周开始检测到抗Namalwa细胞抗体。IgHV3(FR)-IL-2组在首次免疫后第2周开始检测到抗属于IgHV3家族的传代淋巴细胞系的抗体,IgHV3(FR)组第4周开始检测到抗体。IgHV(FR)-IL-2 组免疫小鼠血清IFN-γ含量显著高于pcDNA3.0组和IgHV(FR)组。
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