DC是目前已知的体内功能最强的抗原提呈细胞，外周的DC摄取外来抗原后，保留并提呈此抗原，同时发生迁移，进入淋巴结内初始T细胞循环池，能显著地刺激初始型T细胞增殖，启动、调控、维持免疫应答；能递呈抗原给MHCI类限制性CD8+和MHCⅡ类限制性CD4+T淋巴细胞，把加工处理的抗原肽提呈在细胞膜表面上，并表达高水平的协同刺激分子和粘附分子，以保证与T细胞结合并促进T细胞的有效激活，诱导特异性免疫反应。DC在体内分布广泛，但数量少（仅占外周血单个核细胞的1％左右）且分散，但可由CD34+细胞或单核细胞诱导、衍生、增殖培养。将外周血中贴壁的单个核细胞作为DC的前体细胞，应用细胞因子诱导，可获得更高纯度的DC[5]。目前培养DC的细胞因子组合方案有多种，在培养基中仅加入GM-CSF和IL-4，只能培养出不成熟的DC，只有再加入另外一种或多种细胞因子如TNF-α、IFN-γ等方可诱导产生成熟的DC。本研究从健康成人外周血中获取单核细胞，采取反复孵育多次，延长贴壁时间至5h，使培养DC的数量从1×109/L增加到约2×109/L。为使单核细胞向DC分化，获得最佳的DC成熟度和激活性，实验中我们选用了GM-CSF、IL-4和TNF-α组合诱导扩增培养DC。在培养中，GM-CSF、IL-4都是生成DC所必需的，GM-CSF可促使细胞向DC及巨噬细胞分化，IL-4可抑制巨噬细胞生成而利于细胞向DC分化，TNF-α可进一步促进DC功能的成熟。本研究结果表明，GM-CSF+IL-4联合诱导培养6d，不能诱导DC完全成熟和活化，但有利于DC扩增；加入TNF-α诱导培养10d，DC数量多，成熟度较高，激发初始T细胞增殖的能力较强；而加入CpG ODN1826诱导培养10d，DC数量最多，成熟度最高，激发初始T细胞增殖的能力最强。

　　CpG基序能够刺激机体免疫系统发生免疫反应，主要是由于免疫细胞具有能够识别CpG基序的受体结构。有研究表明[6]，DC作为一种专职APC，其功能主要是加工、处理和提呈抗原，活化T细胞，诱导产生特异性免疫应答，而CpG ODN则对DC的功能有着重要的影响。CpG ODN可增强辅助刺激分子、粘附分子及MHC分子在DC膜表面的表达。Behboudi等[7]发现，将不同浓度的CpG ODN（1、10、100umol/l）与小鼠骨髓来源的DC（bone marrow-derived dendritic cells,BMDC）共同孵育2d后，可诱导BMDC上调MHCⅡ类分子、CD86、DEC205和CD40的表达，而且证实这种作用是剂量依赖性的。如果将CpG ODN中的CpG基序换为GpC后，即使CpG ODN用量高达100umol/l，也不会产生同样的作用，提示CpG基序是产生这种作用的结构基础。Heckelsmiller K等[8]给接种了肿瘤细胞的小鼠协同使用CpG ODN与DC或肿瘤抗原负载的DC时，其亦可有效激活DC，且促进IL-12的分泌，产生较强的抗肿瘤作用。另外，CpG ODN易于合成、极其稳定，低毒，用量小，安全性高，易于体外合成，能通过任何途径给药等[9,10]。因此CpG ODN是一种非常有效和良好耐受可广泛使用的疫苗佐剂，使其成为免疫学研究中的一个热点。

　　本实验中发现，人外周血DC体外经CpG ODN1826刺激后，表面突起细、长且规则，粗面内质网增多，具有典型成熟DC的形态学特征；CpG ODN1826组能促进DC的分化成熟，显著提高DC的含量。同时膜表面MHC II类分子、CD40、CD1a、CD80、CD86的表达明显上调；以四组刺激的DC作为刺激细胞，以T细胞作为反应细胞进行混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR），发现当效靶比为1:10时，经CpG ODN1826处理过的DC能显著激发同种异体混合淋巴细胞反应中T细胞的增殖；另外在体外对胃癌细胞杀伤活性实验中，CpG ODN1826组DC对胃癌细胞的杀伤能力显著高于GM-CSF+IL-4+TNF-α、GM-CSF+IL-4和nonCpG ODN三组DC。这些结果表明，CpG ODN可诱导DC由未成熟状态向成熟状态过渡，促进DC成熟，有效增强DC的功能；同时显著增强DC杀伤胃癌细胞的活性，表现出较强的免疫佐剂功能。但CpG ODN具体通过哪种途径增强DC对胃癌细胞的杀伤活性以及相关机制有待于进一步深入研究。