双龙丸由经典名方止痉散化裁而来,由地龙,全蝎,蜈蚣等组成,具有平肝潜阳,搜风剔络,活血定痛的功效,初步研究证实具有调节PGI2/TXA2平衡的作用,临床用双龙丸治疗的冠心病患者,其心肌缺血总负荷、ET和AngII降低,而浆NO水平升高,证明双龙丸抗AS形成和抗心肌缺血作用与内皮保护作用有关[]。本研究旨在通过建立兔动脉粥样硬化模型,用光镜和电镜从细胞、亚细胞水平探讨双龙丸对平滑肌细胞增生、迁移的作用,为其进一步临床应用提供理论基础。
1、材料和方法
1.1 实验药品及仪器
胆固醇:Sigma(美国)上海分装;猪油:购于市场。开搏通:中美合资上海施贵宝公司生产,批号:0108031,12.5mg/粒。双龙丸:购自上海曙光医院药剂科,每粒0.5g;病理切片机(LEICA RM 2165,德国产);摊片烤片机(CS-IV型,孝感市电子仪器厂生产);光学显微镜照相系统(OLYMPNS,BX60,日本产);H-600-4型透射电子显微镜(日本日立公司制造);电镜摄象系统(PANASONIC; 型号MV-CP410,日本产)。
1.2 动物模型
选取体重2.0-2.5kg的雄性新西兰大白兔(New Zealand Rabbits)(由上海曙光医院实验动物中心提供),随机分为4组,每组6只,单组分笼饲养。I组:空白对照组,饲喂正常颗粒饲料,自由饮水12周。II组:实验对照组,于造模当日清晨一次性注射小牛血清白蛋白1g,然后每天饲喂含1g胆固醇和3%猪油的饲料12周,饮水不限。III组:开搏通对照组,于造模当日清晨一次性注射白蛋白1g,然后每天饲喂含1g胆固醇和3%猪油的饲料,同时每只给予开搏通(captopril)10mg/kg/d,灌胃12周,饮水不限。IV组:双龙丸组:于造模当日清晨一次性注射白蛋白1g,然后每天饲喂含1g胆固醇和3%猪油的饲料,同时每只给予双龙丸(2.52g/kg/d,10倍成人剂量),灌胃12周,饮水不限。
1.3 观察项目
1.3.1 光镜检查
实验末处死,将游离的主动脉段沿长轴剪开,肉眼观察动脉内壁是否光滑,有无AS斑块,取主动脉弓处1cm动脉段用10%福尔马林缓冲液固定、HE染色、石蜡包埋做光镜检查。
1.3.2 电镜检查
气栓处死后,迅速取出主动脉主干,立即投入2.5%戊二醛中4℃预固定2h,用1%的锇酸固定2h,置70%酒精中冰箱过夜,用环氧树脂618包埋制备超薄切片。电镜观察。
1.4 统计学处理
SPSS10.0统计软件,采用独立T检验,以均数±标准差表示。
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