探讨趋化因子受体CXCR4和血管内皮细胞生长因子(VEGF)在骨肉瘤组织中的表达及其与血行转移的相关性。方法 应用组织芯片技术检测56例骨肉瘤组织中CXCR4和VEGF表达并随访其术后2年内远处血行转移的情况。结果 56例骨肉瘤组织中CXCR4和VEGF表达彼此相关。单因素分析显示年龄、性别与CXCR4、VEGF表达不相关,而临床分期、ALP水平升高与CXCR4、VEGF的表达均相关。结论 VEGF是骨肉瘤血管生成过程中最重要的正向调节因子,并且可能通过调节CXCR4的表达,促进肿瘤细胞向特异性靶器官迁移;CXCR4和VEGF表达可作为骨肉瘤预测血行转移的指标。
血行转移是骨肉瘤的主要转移途径,肺部是骨肉瘤转移的主要靶器官。原发部位骨肉瘤细胞增殖过程中,侵袭并突破基底膜,肿瘤性血管生长,瘤细胞穿入血管,在循环系统中存活并运行,滞留于靶器官的微小血管中,再穿出血管形成微小转移灶,逐渐增大增多,形成临床影像学上可显示的转移灶。本研究旨在探讨血管生成相关因子VEGF和趋化因子CXCR4与骨肉瘤血行转移的相关性。
资料和方法
1、研究对象:全部病例选自2002年1月至2006年6月间在上海交通大学附属第六人民医院住院治疗的骨肉瘤患者,符合筛选条件的共56例。56例患者中,男性30例,女性26例。发病年龄7~67岁,平均22.04岁,中位年龄18岁。随访时间为8~58个月,平均随访时间23.50个月,中位随访时间20个月。复发11例,转移31例,死亡19例。组织学类型:普通型51例(骨母细胞型35例,软骨母细胞型9例,纤维母细胞型5例,硬化型2例),特殊类型5例(血管扩张型2例、髓内高分化型2例,皮质旁型1例)。按Enneking 临床分期:Ⅱb期44例, III期12例。HE切片由两位资深病理学医生诊断核实。
2、组织芯片检测:所选病例蜡块作3~4nm的连续切片,采用组织芯片技术检测CXCR4和VEGF蛋白表达,多克隆抗体CXCR4为武汉博士得公司产品,工作浓度1:400,鼠抗人单抗VEGF(即用型)试剂及SP试剂盒购自福州近新公司,实验室操作按试剂盒说明书进行,CXCR4、VEGF经高温、高压修复抗原。磷酸盐缓冲剂(PBS)代替一抗作阴性对照,用已知阳性组织切片作阳性对照。
3、结果判定标准:(1)CXCR4以骨肉瘤细胞核或胞浆内出现橘黄色颗粒为阳性,高倍镜(×400)对每张切片随即选择5个视野,计数100个细胞,共500个,没有染色或核染色阳性细胞数
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