秦亮 何朝宏 任君凯 杨铁军 冯超杰 李靖 赵鹏程 马静 李晶磊

    前列腺癌是男性中常见的肿瘤，在欧美国家发病率最高，发病率已超过肺癌，病死率仅次于肺癌。我国近年来前列腺癌发病率日趋上升 ，成为威胁男性健康的一个主要因素。目前，前列腺癌的早期诊断主要是通过前列腺特异性抗原（prostate specific antigen,PSA）筛查结合直肠指检（Digital rectal examination,DRE）。PSA的发现对于前列腺癌的早期诊断具有里程碑的意义。但PSA只具有前列腺组织特异性，而不具备前列腺肿瘤特异性。大量研究表明早期前列腺癌抗原(early prostate cancer antigen,EPCA)免疫组化染色尤其是血清EPCA的ELISA法检测显示出很好的特异性和灵敏度，如果能将EPCA与PSA筛查联合应用，势必能降低不必要的前列腺穿刺活检数和减少漏诊率，EPCA有可能将成为筛查和诊断前列腺癌新的特异性标记物。河南省肿瘤医院泌尿外科何朝宏

1.材料与方法

1.1 组织标本的收集

前列腺癌（Pca）标本41例，年龄54～86岁(66.4±8.5岁)，9例来自经尿道前列腺电切术切除标本、32例为经直肠超声引导下前列腺系统性穿刺活检获得标本，经病理证实为前列腺癌(均为腺癌)，均无激素和外科去势及放射治疗。良性前列腺增生(BPH)组织标本34例，年龄55～71岁(62.7±5.6岁), 标本是由经尿道前列腺电切术及耻骨上前列腺摘除术获得；5例正常对照组来自根治性膀胱全切术切除的前列腺组织标本。良性前列腺增生(BPH)组织与正常前列腺（NP）组织标本均经病理证实。标本于手术切除及直肠穿刺活检后15 min内置于-80℃冰箱中保存。

1.2 血液标本的收集

为尽量减少可能影响血清EPCA及PSA水平的因素，故在样本的纳入时按以下标准进行收集：①入院前未进行前列腺按摩、经直肠前列腺超声检查、前列腺穿刺活检及膀胱镜检查；②入院前无急、慢性前列腺炎；③因急性尿潴留入院的患者也排除在外。

1.3实验方法

1.3.1 组织mRNA的提取

组织标本于手术切除及经直肠B超引导下前列腺系统性穿刺活检后15 min内置于-80℃冰箱中保存，并经病理检查证实后进行总RNA提取。

1.3.2 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析

用逆转录酶MMLV合成第一链。根据北京全式金生物技术有限公司提供的使用说明书进行。

1.3.3 琼脂糖凝胶电泳

取5ul扩增产物与缓冲液混合后加入琼脂糖凝胶的加样孔中，进行电泳。电泳条件为2％琼脂糖凝胶，电压4～10v/cm。EB染色，在紫外线投射仪下观察电泳条带，电泳条带采用D-140图像记录分析系统进行分析。

1.3.4 ELISA法检测血清EPCA水平

本实验所使用的人（Human）早期前列腺癌抗原（EPCA）检测试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。已知EPCA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。

2.结果

2.1 RT-PCR反应结果

经过凝胶成像系统观察RT-PCR反应产物，所有反转录cDNA以GAPDH引物进行PCR扩增均得到138bp的目的片段，以EPCA基因引物进行PCR扩增，其中前列腺癌组织41份样本中有34例得到411bp大小片段(如图3、4)，表示EPCA mRNA在组织内有表达；前列腺增生症及正常前列腺组织样本中均为阴性(如图3、4)。EPCA mRNA在前列腺癌组织中有82.9%的阳性表达率。结果表明EPCA mRNA在前列腺癌组织中特异性表达。

图1 前列腺癌、前列腺增生PCR产物电泳图

图2  前列腺癌、前列腺增生及正常前列腺组织PCR产物电泳图

2.2 前列腺癌、偶发前列腺癌、BPH及健康对照组的血清EPCA值

31例PCa组、9例IPCa组、181例BPH组及26例健康对照组的术前血清EPCA水平，以及与血清EPCA相关性的各种临床病理特征、相关分组的术前血清EPCA水平，和相关各组之间比较的P值见下表。

表1 PCa、IPCa、BPH及健康对照组的血清EPCA值；相关各组之间比较的P值

特征

例数

均数±标准差

中位数

范围

P值

               EPCA  （ ng/ml ）

临床研究对象

247

7.07±6.98

4.76

0.28～32.46

PCa

31

19.35±7.86

21.11

7.89～32.46